超音波ホモジナイザーが大腸菌を破壊するときの一般的な問題

大腸菌は外来タンパク質を発現する。 超音波処理すると、それは１％トリトン−Ｘ − １００を含有するＰＢＳに懸濁される。 超音波効果が優れています。 1％トリトン-X-100の効果はまだ明らかです。 ストレプトミセスなどの作品。

細菌沈殿は、試料１緩衝液を直接添加し、５ｍｌのメルカプトエタノールを添加し、混合し、遠心分離し、１０分間煮沸し、直接負荷し、染色し、そして脱色する工程は次の通りである。溶液は大量に交換されます。水は10分間電子レンジで調理することができます。

組み換えタンパク質を発現させた後、細胞を４００Ｗの氷浴を用いて超音波で破砕し、２Ｓを１Ｓで停止させたが、短時間で大量の泡が発生し、これは破砕効率に影響を与えた。 Pbsとトリス緩衝液は同じで、ついに粉砕は不完全でした。 しかし、私の標的タンパク質はこれらの壊れていない細胞の中にあるので、実験結果を得ることができません。

この状況と解決策を分析してみましょう。

あなたのプローブの位置がうまく配置されていないため、バブルが生成され、プローブは約1センチメートル（私は通常下から0.5センチです）、底部に近い必要がありますが、あなたは観察することができますページには、変動がありますが、あまり積極的にならないでください。

2.スーパー3Sは10S、超音波効果を見るために約20回超音波を止めます

3.ホーンの位置に注意してください。 あなたが正しくないならば、あなたは時間内にそれを調整するべきです。 また、細菌の濃度の観点から、粉砕するときの量を増やすようにしてください、強度は60％を超えてはいけません。

4. 8Sを試してSuper 8Sを試してください。 バクテリアタンパク質の中には、熱を消散させるのが困難なものもあり、その結果、タンパク質が変性して泡が発生します。 もう少し長い間休止するのが最善です。 これは包含体の形でより一般的です。