遺伝子銃の使い方

材料の準備

培地の薄層を9 cm 2の培養皿に置き、材料（通常未熟胚、成熟胚、小さなカルス、懸濁細胞、プロトプラストなど）を直径3 cmで皿の中心に蒔いた。 。

2、金粉の扱い

遠心管に60mgの金粉末またはタングステン粉末を取り、1mlの無水エタノールを加え、3分間よく振盪し、9615gで1分間遠心し、上清を除去し、1mlの滅菌水を加えそしてよく混合し、9615gで遠心分離し、上記のステップ3を繰り返す。 タイムズ。 最後に、金粉末を１ｍｌの滅菌蒸留水に懸濁し、そして４℃または室温で貯蔵した。

3、DNA処理

50μAの金粉末懸濁液を取り、5μlのプラスミドDNA（1.0 /μg〜1）溶液を添加する。

０．１ｍｏｌ ／ Ｌスペルミジン（使用した溶液は滅菌滅菌した）、３分間振盪し、室温で１０分間放置し、９６１５ｇで１０秒間遠心分離し、上清を捨てた。 無水エタノール250μlを加え、9615 gで10秒間遠心し、上清を捨てる。 ペレットを６０／１１の無水エタノールに再懸濁し、５ショットに使用した（１ショットあたり１０から１）。

4、遺伝子銃の操作

遺伝子銃のすべての操作は、以下のように無菌条件下で行われます。

1）遺伝子銃とサンプルチャンバーの表面を70％エタノールで消毒する。 同時に、バリアネットおよび切断可能なディスク、マイクロ弾性キャリア、そのホルダー、および固定具を７０％エタノールで１５分間浸し、その後、清潔な台の上に置いて乾燥させた。 分割可能なダイヤフラム、固定カバー、およびマイクロ弾性キャリア発射装置は、７０％エタノールで表面滅菌し、ブロー乾燥することができる。

２）微粒子スライドを止め輪に挿入し、微粒子スライドの中心にＤＮＡと金粉末の混合物を加え、約１分間乾燥する。

3）破裂可能なメンブレンをホルダーに取り付け、ガス加速器の上に時計回りに回します。

4）スペースリング、ブロッキングネット、ブロッキングネットホルダー、パーティクルキャリア、固定リング（パーティクルが下を向くように面する）を取り付け、カバーを締めてグラブに挿入します。

5）サンプルをボンバードメントチャンバーに入れ、ドアを閉めます。

6）ヘリウムシリンダーのメインバルブを開き、圧力計ポインターの表示がダイヤフラム圧力200Psi（= 1.379MPa）より高くなるように、ヘリウムレギュレータバルブを時計回りに回します。

7）遺伝子銃とトランススイッチをオンにします。

8）バキュームボタンを押す。 真空度が26-28in Hg（= 88.05〜94.82kPa）になったら、すばやくHoldボタンを押してから、起動ボタンを押したままにして起動するまで押し続けます。

9）真空テーブルがゼロになったら、ベントキーを押してサンプルをリセットします。

10）シャットダウンします。

ヘリウムシリンダーのメインスイッチを締め、空のガンを撃ち、圧力計の指針をゼロに戻してから、圧力計調整バルブを反時計回りに回転させます。 遺伝子銃のメインスイッチとトランススイッチをオフにします。